液體培養基中細菌培養實驗步驟
點擊次數：482 更新時間：2025-02-19
儀器、耗材玻璃瓶燒瓶
實驗步驟
一、過夜培養
1.將5 ml預熱的液體培養基移入一無菌的16 mm或18 mm管中。
2.用接種環挑一個單菌落，浸沒于培養液中并輕輕振動接種環，使待接種的細菌分散在培養液中。
3.蓋好試管，在搖床或轉鼓式培養裝置上以60 r/min速度，于37°C培養至飽和（1X109~2X109細胞/ml，>6 h）。
二、大體積培養
1.在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鮮預熱的培養液按I1:100的比例稀釋過夜培養物，燒瓶的體積應該是培養液體積的5倍以上。
如果不搖動培養，所用燒瓶的體積應比培養液體積大20倍以上，以確保足夠的通氣。
2.37°C，劇烈搖動培養（約300 r/min)。
三、利用計數板監測生長情況
1.用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計數玻片（或者血球計)。
2.小心地將一小滴培養液滴到蓋玻片的邊緣，這樣培養液可擴散人蓋玻片下。
3.在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個小方塊中所見的每個細菌大約相當于2X107細胞/ml計算細菌濃度。
四、利用分光光度計監測生長情況
因為儀器的差異性，分光光度計應該用一已知濃度的培養液進行校準。
1.測OD600。為了獲得一個準確的讀數，稀釋培養液至OD600＜1。
2.按每0.1 OD值大約相當于108細胞/ml計算細菌濃度。
