試劑原理：
本品利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀條件不同，通過大量實驗分析驗證而得到的一個與傳統(tǒng)沉淀純化相比有較大不同的精細的具有高活性、高產(chǎn)率、快速以及良好重復(fù)性的單克隆抗體的純化方法。
試劑特點：
特點在于純化操作的簡單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實驗表明，本試劑盒可以得到90%左右純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過程中幾乎沒有損傷，保持應(yīng)有的活性；重復(fù)性和實際應(yīng)用好。
適用范圍：
本試劑盒適用于小鼠IgG類包含IgG1\IgG2a\IgG2b亞類的單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgG3、IgM和IgA類單克隆抗體腹水的純化實驗，如需要可選擇本公司其它貨號的純化試劑，它能為您帶來良好的結(jié)果。
試劑組成：
純化液A
純化液B
純化液C
純化液D
純化液E
透析試劑（粘稠或固體）
透析袋
說明書
純化步驟：
1、 從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復(fù)溫度30分鐘，期間可將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫復(fù)溫15分鐘，隨后用自來水邊沖邊搖勻快速解凍。
2、 將化開的單克隆抗體腹水8000-12000RPM， 4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘。
3、 離心完畢上面若有浮沫和油脂先吸棄，然后將上清轉(zhuǎn)出到另一個干凈容器或離心管；按每1mL單克隆抗體腹水加入純化液A（加前確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1mL（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻30分鐘。
4、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積，再按此體積每1mL加入純化液C （加前確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）1mL（（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻10分鐘。
5、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1mL上清液加純化液D（加前確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1mL（必須精確），使用搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀室溫到37℃溫度區(qū)間內(nèi)混勻20分鐘。
6、 8000RPM，4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/3。透析袋用純水浸泡3-5分鐘，然后用手揉捏數(shù)次，接純水沖洗干凈，抗體放入扎好。透析液是用純水溶解透析試劑到8L（也可先全部溶解到800mL，使用時10X稀釋），透析依照抗體體積：透析液體積=1:100以上，4℃透析過夜。收集透析后抗體。
7、 以透析后抗體體積：純化液E的體積=9：1的比例加入純化液E搖勻（也就是9體積抗體加1體積純化液E），靜置5min。8000RPM,4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘，棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。
8、 將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。抗體體積：透析液體積=1:50以上；4℃透析，中間換液三次，透析總時間不超過24小時。然后8000RPM, 4℃-37℃溫度區(qū)間內(nèi)離心10分鐘，收集上清測蛋白濃度后（可添加合適的防腐劑）-20℃存放備用。
特別提示：如果您在實驗過程中遇到任何困難，請在第一時間聯(lián)系我們獲取支持。
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