小鼠Elisa試劑盒使用指南：從樣本處理到結(jié)果解讀的全程指導(dǎo)
點(diǎn)擊次數(shù)：734 更新時(shí)間：2024-10-15
小鼠ELISA試劑盒是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的工具，用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液等樣本中的特定目標(biāo)蛋白。為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，從樣本處理到結(jié)果解讀的每一步都需要嚴(yán)格遵循操作指南。
一、樣本處理
樣本處理是ELISA實(shí)驗(yàn)的第一步，也是至關(guān)重要的一步。不同類型的樣本需要不同的預(yù)處理方法。
血清：將采集的血液樣本在室溫下放置2小時(shí)或4℃過夜，使其自然凝固。然后，以1000×g離心20分鐘，收集上清液（血清）。建議在-20℃或-80℃下保存，避免反復(fù)凍融。
血漿：使用含抗凝劑的采血管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi)，4℃下以1000×g離心15分鐘，收集上清液（血漿）。同樣，建議在-20℃或-80℃下保存。
細(xì)胞裂解液：細(xì)胞裂解液需要經(jīng)過裂解處理，以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。這通常涉及反復(fù)凍融或使用超聲波細(xì)胞破碎器。裂解后，以高速離心去除細(xì)胞碎片，收集上清液。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與操作
在實(shí)驗(yàn)開始前，確保所有試劑和樣本都已平衡至室溫。按照試劑盒說(shuō)明書準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀釋液、檢測(cè)抗體等。
加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑，然后封板并置于37℃溫育一段時(shí)間。
洗滌：溫育后，小心揭掉封板膜，棄去液體，用洗滌液洗滌多次，確保充分去除殘留的液體。
顯色：加入顯色劑A和B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色一段時(shí)間。
終止：加入終止液，終止反應(yīng)。
三、結(jié)果解讀
使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中目標(biāo)蛋白的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過將標(biāo)準(zhǔn)品濃度與相應(yīng)的吸光度值進(jìn)行關(guān)聯(lián)而繪制的。
四、注意事項(xiàng)
嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，避免交叉污染。
洗滌步驟要che底，確保充分去除殘留的液體。
避光保存試劑盒和底物溶液，避免光照影響試劑活性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時(shí)清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和器材，并進(jìn)行消毒。
通過以上步驟，您可以成功使用小鼠ELISA試劑盒進(jìn)行目標(biāo)蛋白的定量檢測(cè)。希望這份全程指導(dǎo)對(duì)您有所幫助！
