大腸桿菌感受態細胞的制備經驗分享
點擊次數：769 更新時間：2024-03-19
細菌處于容易接受外源DNA的狀態稱之為感受態，通過物理或化學的方法，人工誘導細菌細胞成為敏感的感受態細胞是重組DNA轉化細菌技術的關鍵。制備出感受態細胞，我們就可以方便的將需要克隆的質粒導入其中，使其繁殖，從而獲得大量的質粒。CaCl2轉化法是常用的感受態細胞制備方法，其制備流程簡單，快捷，成本低，并且能夠滿足普通的轉化和克隆的需求。
判斷感受態細胞制備的優劣主要是通過轉化效率來檢測。經轉化外源質粒DNA的大腸桿菌在含抗性的LB平板過夜培養后，平板上長滿克隆且陰性對照（未轉入外源DNA的感受態）沒有克隆，證明感受態細胞制備良好。
注意事項：
1、在制備感受態細胞過程中，所有用到的耗材，試劑均要求無菌，操作過程也要求wan全按照無菌操作進行，避免雜菌及污染。
2、制備感受態的菌株最好是先將甘油菌劃線于無抗性的LB平板中進行活化，然后挑選單克隆的液體培養基中培養。如果甘油菌溶解后直接在液體培養基中培養來制備感受態，會影響感受態細胞的活性。
3、在制備感受態細胞的過程中，保持各環節處于低溫環境，4℃離心，冰上重懸，CaCl2溶液置于冰浴中，以保證感受態細胞的轉化效率。
4、重懸細胞時，盡量避免吹打細胞造成細胞損傷，通過輕輕震蕩使細胞重懸，減少對菌株的損傷從而影響其活性。
5、制備好的感受態細胞應盡快使用，存放過久會影響其轉化效率。
6、感受態細胞不宜反復凍融，因為凍融過程中產生的冰晶會對細菌細胞造成傷害。
