單克隆抗體是利用體外培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的抗體，它由于是由一個(gè)細(xì)胞分裂而來(lái)的，所有只含有一種抗體。
單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結(jié)合的特異性強(qiáng)、便于人為處理和質(zhì)量控制，并且來(lái)源容易。這些優(yōu)點(diǎn)使其廣泛應(yīng)用于抗腫瘤等領(lǐng)域，缺點(diǎn)就是生成的抗體只針對(duì)1種抗原決定簇，比較單一。
基本過(guò)程：
1.抗原的處理
2.在小鼠體內(nèi)植入抗原（免疫）
3.取免疫鼠的B淋巴細(xì)胞
4.與鼠的骨髓瘤細(xì)胞用PEG細(xì)胞融合
5.在多孔板上篩選。雜交瘤細(xì)胞就是上面的34兩步
原理1：?jiǎn)慰寺】贵w（MAb）與抗血清（又稱多克隆抗體，PAb）最主要的區(qū)別是MAb為單一種B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B細(xì)胞克隆的標(biāo)志，是一種du特型的抗體，它的特異性是針對(duì)一個(gè)抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學(xué)分離的方法從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞克隆的方法得到它。為了使B細(xì)胞克隆能在體外人工培養(yǎng)下長(zhǎng)期存活并產(chǎn)生wan全均一的MAb，G．K?hler合Milstein于1975年創(chuàng)立了雜交瘤方法。所以制備單克隆抗體的技術(shù)又稱雜交瘤技術(shù)（hybredoma technique）。
雜交瘤技術(shù)的基本原理是用分泌抗體但不能長(zhǎng)期培養(yǎng)的B細(xì)胞與能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)并可低溫保存的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交。篩選得到的雜交瘤細(xì)胞應(yīng)該是既能分泌抗體又有瘤細(xì)胞的特性，可長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，又可在液氮中保存的細(xì)胞。把這些細(xì)胞單克隆化，用單克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行單克隆抗體的生產(chǎn)。
原理：最chang用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復(fù)雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c小鼠的B細(xì)胞和它的骨髓瘤細(xì)胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細(xì)胞。B細(xì)胞是從免疫動(dòng)物的脾臟中分離出來(lái)的。動(dòng)物免疫方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進(jìn)行一次靜脈加強(qiáng)注射以保證得到的B細(xì)胞有旺盛的分泌抗體的活性。骨髓瘤細(xì)胞有許多細(xì)胞株是經(jīng)過(guò)誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標(biāo)準(zhǔn)是①瘤細(xì)胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌；②是次黃b呤鳥(niǎo)嘌y核苷酸轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷型。因?yàn)檫@種缺陷型的瘤細(xì)胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟（aminopterin）阻斷后，由于缺失這些酶，即使補(bǔ)充它的底物次黃嘌y（H）和胸腺嘧啶（T），核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，結(jié)果導(dǎo)致瘤細(xì)胞死亡。而雜交瘤細(xì)胞因帶有B細(xì)胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過(guò)替代的核酸合成途徑能正常合成DNA和RNA。所以雜交瘤能正常地生長(zhǎng)繁殖而被選擇出來(lái)。未被融合的游離的B細(xì)胞只能存活3d而后自行死亡。這就是用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行選擇的原理。
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