影響標(biāo)本固定的因素很多，如組織與固定液的比例、固定時(shí)間、固定溫度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所選固定液不當(dāng)，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、脂類、核 酸等成 分將會(huì)有不同程度地?fù)p失。固定劑最好隨配隨用，并注意其濃度和酸堿度。因此根據(jù)實(shí)際工作的目的，選用合適的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方 法及適用范圍。
1．單純固定液
(1)4％中性甲醛固定液：最chang用的固定液，能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作。一般無(wú)特殊要求的病理標(biāo)本均適用。尤其值得注意的是，中性甲 醛是以 pH 7．2～7．4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對(duì)組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處，保存時(shí)間不 超過(guò)一個(gè)月。
甲醛(40%) 100 ml
無(wú)水磷酸氫2鈉 6.5 g
磷酸2氫鈉 4.0g
蒸餾水 900 ml
(2)乙醇固定液：使用時(shí)以80％～95％的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對(duì)組織滲透力較弱，因此很少單獨(dú)使用，但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實(shí)驗(yàn)或檢查，如果用于證明尿酸結(jié)晶和保存糖原，可用100%乙醇固定組織。
(3)4％的多聚甲醛：主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福爾馬林，AF)固定液：適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標(biāo)本可直接入95％乙醇脫水。
甲醛(40％) 100 ml
95％乙醇 900 ml
(2)B5(醋酸鈉一升gong一甲醛)固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應(yīng)進(jìn)行脫gong沉淀處理。
無(wú)水醋酸鈉 1.25 g
升gong 6.0 g
蒸餾水 90 ml
使用前加入甲醛 10 ml
(3)Bouin固定液：特別適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對(duì)組織固定較均勻，收縮很少，不會(huì)使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。
飽和ku味酸水溶液(約1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰cu酸 5 ml
(4)Carnoy固定液：穿透能力強(qiáng)，可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，特別適合于固定外膜致密的組織，亦適用于糖原及尼氏小體的固定。
無(wú)水乙醇 60 ml
lv仿 30 ml
冰cu酸 10 ml
(5)Zenker固定液：經(jīng)此液固定的標(biāo)本，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色頗為清晰，但成本較昂貴且需特殊處理gong。該固定液要避免接觸陽(yáng)光，以免引起化學(xué)變化而失效。
升gong 5.0 g
重鉻酸鉀 2.5 g
* 1.0g
蒸餾水(加至) 100 ml
 |
 |
 |
